Calendario científico junio de 2024
Presencia de hemoglobina inestable
¿Qué diagrama de dispersión proporciona resultados falsos en el caso de una variante de la hemoglobina?
Diagrama de dispersión WNR
Diagrama de dispersión WDF
Diagrama de dispersión RET
Diagrama de dispersión PLT-F
Congratulations!
That's the correct answer!
Sorry! That´s not completely correct!
Please try again
Sorry! That's not the correct answer!
Please try again
Notice
Please select at least one answer
Fundamentación científica
Las variantes de la molécula de hemoglobina se encuentran entre los trastornos genéticos más comunes [1]. Aunque la mayor parte de las más de 1200 variantes conocidas de la hemoglobina (variantes Hb) no tiene efectos clínicos, se sabe que aproximadamente 150 variantes Hb inestables causan anemias hemolíticas de diversa gravedad [2].
A nivel molecular, las variantes Hb suelen estar causadas por intercambios de un solo aminoácido en la proteína globina que dan lugar a estructuras y propiedades bioquímicas diferentes (por ejemplo, afinidad por el oxígeno) de la molécula de hemoglobina. Las mutaciones que dan lugar a moléculas de hemoglobina inestables se consideran raras a nivel individual. Por convención, estas variantes reciben el nombre del origen geográfico de la persona afectada y la mayoría de ellas se almacenan en una base de datos global de genes. Los efectos fisiológicos de estas variantes Hb pueden ir desde afecciones clínicas silenciosas hasta enfermedades graves [2,3].
Muchos países han implantado pruebas rutinarias en todos los recién nacidos para identificar las hemoglobinopatías. El enfoque isoeléctrico o la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC, por sus siglas en inglés) son las pruebas más utilizadas para identificar la mayoría de las hemoglobinas estructuralmente anormales. De este modo, muchas variantes Hb benignas se hallan de manera incidental [3].
En nuestro caso del mes, presentamos los resultados de medición de un paciente con la variante Hb «Hb G Ferrara», que se describió inicialmente en el seno de una familia italiana [4]. Desde entonces, se ha descrito en diferentes informes de casos como una variante de hemoglobina ligeramente inestable [5 - 6]. En esta variante Hb se sustituye un residuo de asparagina por un residuo de lisilo en la posición β57 (β57 Asn → Lys), lo que provoca una modificación de la estructura y las propiedades de la proteína y la introducción de una carga positiva adicional que cambia la carga neta de la proteína [4 - 6].
Las pruebas del frotis sanguíneo de pacientes portadores de Hb G Ferrara muestran una morfología alterada de los eritrocitos, como eritrocitos de forma irregular y células diana [5].
Resultados del caso
Un paciente varón acude a su médico de cabecera para someterse a una revisión rutinaria. El hemograma completo parecía normal en su mayor parte, excepto por un hematocrito ligeramente disminuido y un aumento del RDW-CV que hizo saltar el mensaje de alerta «Anisocytosis». Un MCHC bajo generó el aviso «Hypochromia».
Curiosamente, el diagrama de dispersión WDF mostraba todas las subpoblaciones de leucocitos (WBC) con señales de fluorescencia muy bajas que aparecían en el extremo inferior del diagrama de dispersión. En consecuencia, el analizador de la serie XN generó el aviso «WBC Abn Scattergram» y señaló la posición anormal de los grupos celulares.
Interpretación del diagrama de dispersión
Se ha observado que el análisis del canal WDF de los analizadores de la serie XN de Sysmex se ve afectado en caso de anomalías de la hemoglobina. También se han observado señales de fluorescencia bajas que han dado lugar a una posición baja de los grupos celulares, lo que ha generado grupos celulares parcialmente grises. Sin embargo, los diagramas de dispersión del canal WNR no se han visto afectados [7 - 10]. Aunque la causa de esta alteración del canal WDF no queda totalmente explicada, la hipótesis es que la liberación de hemoglobina inestable durante la lisis de los eritrocitos podría interferir con el proceso de tinción de los leucocitos con reactivo fluorescente [7]. Una posible explicación podría ser que el marcador fluorescente de polimetina, que se utiliza en los analizadores para hematología de Sysmex para la diferenciación leucocitaria, podría fijarse a la variante de la molécula de hemoglobina con mayor afinidad que a los ácidos nucleicos de los leucocitos [9]. Las observaciones microscópicas de las muestras de sangre afectadas no han mostrado alteraciones en las poblaciones de leucocitos [8, 9].
Los estudios han sugerido que este patrón indica claramente la presencia de una variante de la hemoglobina y debería ser objeto de una investigación más profunda [7, 8, 10]. Combulazier y otros estudiaron a varios pacientes con diferentes variantes de hemoglobina inestable y descubrieron que los parámetros fluorescencia del lado de los linfocitos (LY-SFL; equivalente a LY-Y) y fluorescencia del lado de los neutrófilos (NE-SFL) mostraban una sensibilidad y una especificidad excelentes. Esto les permitió clasificar al 100 % de los pacientes con variantes de hemoglobina inestable de su cohorte de estudio [9].
El efecto visible en el diagrama de dispersión WDF puede tener diferentes intensidades, tal y como se muestra en la Fig. 2. Una característica común que puede observarse en todos los casos es una señal de fluorescencia baja en todos los grupos celulares. No obstante, el grupo celular puede estar total o parcialmente (A y D) en gris, o no estarlo en absoluto (B y C), o el análisis del grupo celular puede estar alterado (C).
Bibliografía
[1] Wajcman H et al. (2011): Abnormal haemoglobins: detection & characterization. Indian J Med Res. 134. pp 538 – 546.
[2] Hilbert S et al. (2020): Hemolytic anemia due to the unstable hemoglobin Wien: manifestations and long-term course in the largest pedigree identified to date. Haematologica. 105(5): e253–e255.
[3] Thom CS et al. (2013): Hemoglobin Variants: Biochemical Properties and Clinical Correlates. Cold Spring Harb Perspect Med. 3:a011858.
[4] Giardina B et al. (1978): Properties of hemoglobin G. Ferrara (β57(E1) Asn → Lys). Biochim Biophys Acta. 534(1): 1-6.
[5] Rosetti M et al. (2016): Serendipitous detection of Hemoglobin G-Ferrara variant with Sysmex DIFF channel. Clin Biochem. 49(1-2): 192-3.
[7] Adam AS et al. (2022): Rare unstable and low oxygen affinity haemoglobin variant, Hb Hazebrouck, detected on Sysmex XN-9000. Clin Chem Lab Med; 60(5): e116-e118.
[8] Moioli V et al. (2019): Mozhaisk haemoglobin variant effects on leukocyte differential channel using the Sysmex XN series. Clin Chem Lab Med. 57(12): e324-e327.
[9] Combaluzier S et al. (2023): Detection of unstable haemoglobin variants with Sysmex XN-10. Int J Lab Hematol; 45(2): e21-e23.
[10] Jongbloed W et al. (2018): Unstable haemoglobin variant Hb Leiden is detected on Sysmex XN-Series analysers. Clin Chem Lab Med. 56(9): e249–e250.
