Calendario científico diciembre de 2024
Leucemia mieloide aguda (LMA)
¿Cuáles son las características de los blastocitos en el canal WPC tras el tratamiento con reactivos?
El reactivo de lisis no impregna de forma intensiva los blastocitos, de modo que presentan señales de fluorescencia bajas y señales altas para el tamaño celular.
Los blastocitos se lisan en gran medida, lo que produce unas señales de fluorescencia más altas y señales de tamaño más débiles.
Los blastocitos se encojen durante el tratamiento con reactivos, lo que produce bajas señales de fluorescencia y señales de menor tamaño.
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Fundamentación científica
Leucemia mieloide aguda
La leucemia mieloide aguda (LMA) es el tipo más frecuente de leucemia aguda en adultos y se caracteriza por la proliferación clónica de células precursoras mieloides en la médula ósea [1]. La mayor incidencia de LMA se observa en Europa, en especial en el Reino Unido, con una incidencia de 4,05 por 100 000 habitantes. Sin embargo, la LMA se considera una enfermedad rara y afecta principalmente a ancianos [1]. En el 97 % de los casos de LMA, se producen alteraciones genéticas en los precursores de células madre del linaje mieloide, lo cual da lugar a cambios neoplásticos y proliferación clónica [2]. Estas mutaciones son heterogéneas y presentan diversas anormalidades citogenéticas y moleculares en varias clases funcionales [3]. La OMS definió una referencia para el diagnóstico de LMA que requiere al menos un 20 % de blastocitos mieloides en la sangre periférica o la médula ósea [4]. El diagnóstico y la supervisión de LMA requiere un enfoque integral compuesto de análisis hematológico y morfológico, citometría de flujo clínica y análisis molecular.
Detección de blastocitos con los canales Sysmex WDF y WPC
El análisis clásico CBC+DIFF de los analizadores de hematología de rutina de Sysmex brinda una indicación inicial de la presencia de células anormales. Se puede complementar con información adicional recopilada del canal de leucocitos patológicos y precursores (WPC).
La membrana de los leucocitos (WBC) tiene una composición distinta dependiendo de su madurez, función y estado de activación. El canal de diferenciación leucocitaria (WDF) utiliza un marcador de fluorescencia capaz de separar subtipos de WBC según estas diferencias en la composición de la membrana y el contenido citoplasmático. El reactivo de la lisis actúa con bastante suavidad, perforando la membrana celular y dejando prácticamente intacta la estructura interna de las células. De esta forma, permite que el marcador de fluorescencia penetre en las células y marque principalmente el ARN de su interior. Dependiendo de la señal de fluorescencia de los cúmulos celulares, se activan mensajes de aviso específicos que preclasifican la muestra como negativa, reactiva o potencialmente maligna. Basándose en esta preclasificación en el canal WDF, se activa el mensaje de aviso «Blasts/Abn Lympho?» (¿Blastos/linfocitos anormales?) o la combinación «Blasts/Abn Lympho?» (¿Blastos/linfocitos anormales?) y «Atypical Lympho?» (¿Linfocitos atípicos?), dando lugar a una medición automatizada de la reflexión en el canal WPC (Fig. 1).
El reactivo de lisis del canal WPC tiene un mayor impacto en los lípidos de las membranas que el canal WDF, lo que aumenta la permeabilidad de las membranas celulares. Dado que la concentración de polimetina del reactivo fluorescente de WPC es mayor que la del canal WDF, marca el ADN del núcleo de las células en lugar del ARN citoplasmático. Para diferenciar subpoblaciones se pueden utilizar las características especiales de los diversos WBC, por ejemplo, entre linfocitos anormales y blastocitos (Fig. 2).
La LMA se caracteriza por la presencia de blastocitos del linaje mieloide. Los blastocitos presentan una composición baja en lípidos, lo que los hace más resistentes a la lisis celular incluso con reactivos de lisis de WPC fuertes. La permeabilidad celular se reduce y con ello se emite una señal de fluorescencia más baja combinada con una señal alta para el tamaño celular, puesto que las células permanecen prácticamente intactas. Estas características permiten la identificación fiable de blastocitos en el canal WPC.
Las muestras marcadas durante la medición de WDF se someten a un análisis de reflexión y, a continuación, o bien la anormalidad se clasifica con un mensaje más específico (por ejemplo, «Blasts» [¿Blastos?] o «Abn Lympho?» [¿Linfocitos anormales?]) o bien el mensaje se elimina.
Samples that are suspicious for haematologic malignancies such as AML will undergo further specialised analysis. By flow cytometric immunophenotyping, suspicious cells are characterised in more detail by utilising these cells’ specific surface and intracellular markers. In the molecular lab, specific mutations can be evaluated by cytogenetic techniques such as fluorescence in situ hybridisation (FISH) and next-generation sequencing (NGS).
Including these disciplines allows clinicians to combine data from various tests, leading to a comprehensive understanding of the patient’s condition and the identification of an individually targeted and effective treatment strategy.
Case results
A 70-year-old female patient was undergoing several courses of chemotherapy and radiation for non-small cell lung carcinoma. She presented at an outpatient clinic after developing malaise and markedly decreased exertion. Blood testing on an XR-Series analyser initially revealed anaemia, thrombocytopenia, and slight leucocytosis (Fig. 3).
En el canal WDF se activó el mensaje «IG Present» (Presencia de IG). El recuento de granulocitos inmaduros (IG) incluye promielocitos, mielocitos y metamielocitos y es relevante en especial en pacientes muy predispuestos a infecciones debido a un sistema inmunitario inhibido, por ejemplo, a causa de la quimioterapia. La presencia de granulocitos inmaduros indica la gravedad de la respuesta inmunitaria temprana e innata.
Además, el analizador activó el mensaje «Blasts?» (¿Blastos?) del canal WPC y el diagrama de dispersión correspondiente mostró una mayor presencia de células en el área de los blastocitos (Fig. 4). Este resultado es indicativo de la presencia de cáncer en fase aguda, como leucemia mieloide o linfoblástica.
A continuación, se realizó un frotis para inspeccionar la morfología y el recuento de células, donde se observó que el 75 % eran blastocitos. El inmunofenotipaje posterior en el laboratorio de flujo clínico confirmó la sospecha de LMA.
Bibliografía
[1] Dong Y et al. (2020): Leukemia incidence trends at the global, regional, and national level between 1990 and 2017. Exp Hematol Oncol; 9:14.
[2] Pelcovits A et al. (2020): R I Med J; 103(3). Acute Myeloid Leukemia: A Review.
[3] Kayser S et al. (2023): The clinical impact of the molecular landscape of acute myeloid leukemia. Haematologica; 108(2):308–320.
[4] Khoury JD et al. (2022): The 5th edition of the World Health Organization Classification of Haematolymphoid Tumours: Myeloid and Histiocytic/Dendritic Neoplasms. Leukemia; 36(7), 1703–1719.
